Z6·尊龙凯时

Casitas B lymphoma-b (CBL-B)是一种 E3 泛素连接酶，最初被表征为原癌基因，但现在被理解为在调节效应 T 细胞功能中起核心作用。在没有 CD28 共刺激的情况下，CBL-B 已被确定为 T 细胞活化的关键抑制剂。通过信号转导的复杂相互作用，CBL-B 抑制 T 细胞转录活性并促进先天性和适应性免疫的免疫耐受性。CBL-B 特异性 siRNA 的小分子抑制剂为治疗免疫相关疾病（包括自身免疫性疾病、播散性念珠菌病和肿瘤）提供了一个有前途的治疗靶点。它也是小分子抑制剂有吸引力的靶标。Cbl 蛋白家族由一个保守的 N 端酪氨酸激酶结合 （TKB） 结构域、一个短连接子区域和一个无名指 （RF） 结构域，如下图。TKB结构域由一个4螺旋束（4H）、一个带有EF手折叠的钙结合结构域和一个变异Src同源区2（SH2）结构域组成，这三者都是形成独特的磷酸酪氨酸结合（PTB）模块所必需的。TKB 结构域可识别并结合含有 ZAP-70 和 Syk 等蛋白质中特定磷酸酪氨酸基序的底物蛋白。 具有内在 E3 连接酶活性的保守 RF 结构域可以募集 E2 Ub 结合酶，并介导 Ub 向靶底物的转移。RF结构域的结构完整性对于Cbl蛋白作为E3 Ub连接酶的功能是必不可少的。Cbl 蛋白的 C 末端区域不太保守，并且包含富含脯氨酸 （PR） 的区域，介导其与含 SH3 的蛋白质的结合。c-CBL和CBL-B的C-末端，有一个保守的结构域，称为泛素相关（ubiquitin-associated （UBA）结构域。UBA结构域能够相互作用，这使得c-Cbl和Cbl-b之间的同源二聚化和异源二聚化成为可能。

一、产品及服务

1. CBL-B相关蛋白

2.CBL-B & c-CBL Activity Assay

3. CBL-B & c-CBL displacement assay

4. CBL-B & c-CBL ELISA assay

5. CBL-B & c-CBL SPR assay

1. CBL-B Activity Assay

正常情况下，带有标签的CBL-B在ATP存在下发生被SRC磷酸化，磷酸化后和泛素结合酶E2-Ub结合，加入检测试剂（Streptavidin - Tb）和anti-flag-d2 antibody后可以检测到高的HTRF信号值，若化合物抑制CBL-B作用将不会和E2-Ub结合，也就不会有HTRF的信号。

2. CBL-B Displacement Assay

CBL-B蛋白带有Biotin的标签，底物为带有荧光基团的CBL-B抑制剂。正常情况下，当带有荧光基团的抑制剂和CBL-B蛋白结合时，实验体系中加入带有Streptavidin标签的Tb，当有337nm的激发光时，镧系元素Tb在490nm处会有一个发射光，同时会发生荧光共振能量转移，在 520nm也会有一个发射光；当有化合物加入时，和带有荧光基团的抑制剂竞争性结合蛋白，两者分离后，在520nM处就检测不到荧光信号。

3. CBL-B ELISA assay

正常情况下，带有Biotin标签的CBL-B在ATP存在的情况下被SRC-ZAP70磷酸化，磷酸化后和泛素结合酶E2结合,洗掉未被结合的组分后加入带有Streptavidin标签HRP，加入TMB后可检测到高的化学发光值。当抑制剂和CBL-B预孵育后，CBL-B活性被抑制将不会和E2结合，经过洗涤的过程后加入SA-HRP，将检测不到化学发光值。

4. SPR assay

表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）是一种物理光学现象，被广泛应用于生物分子相互作用的检测。是利用金属（通常是金）表面上的自由电子与入射光发生共振，形成表面等离子波。当这些等离子波与入射光的特定条件（如入射角和波长）相匹配时，会发生共振，导致反射光强度的显著减弱。这种共振条件对金属表面的折射率非常敏感，因此当有生物分子与金属表面的薄膜结合或与已吸附的分子相互作用时，会导致共振角度发生偏移，从而可以监测到这种变化。

三、数据展示

1.相关蛋白纯化结果

2. Activity Assay

3. Displacement Assay

4. ELISA assay

5.SPR assay

参考文献